蛋白纯化系统是一种用于基础医学领域的医学科研仪器,于2011年12月06日启用。蛋白纯化技术是生物研究领域的一项重要技术。要研究某一个特殊蛋白质,首先就要将这个蛋白从生物体中分离纯化出来。蛋白纯化方法主要是利用不同蛋白质间的相似性与差异。依据蛋白间的相似性可以去除非蛋白物质,再根据蛋白质的差异性将目的蛋白分离出来。
蛋白纯化系统的优缺点:
一.分子筛(凝胶层析)
优点:
1.洗脱条件简单,往往只需要一种缓冲溶液,可以使用任何缓冲液。
2.实验操作相对简单
3.条件温和,对蛋白活性保持率高
4.既可以对标签蛋白纯化也可以对非标签蛋白纯化。
缺点:
1. 工艺放大困难:分子筛层析无法遵循线性放大原则,即使遵循柱床高度不变的原则,工艺流速如何进行调整,也是需要面临的问题。
2. 层析柱装填困难
3.对上样量有要求
4.测定柱效困难
5.反复使用层析柱困难
二.亲和层析
优点:
1. 亲和层析法是分离蛋白质的一种极为有效的方法,它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来,而且纯度很高。
2. 是最有效的生物活性物质纯化方法,它对生物分子选择性的吸附和分离,可以取得很高的纯化倍数。此外蛋白在纯化过程中得到浓缩,结合到亲和配基后,性质更加稳定,其结果提高了活性回收率。此外它可以减少纯化步骤,缩短纯化时间,对不稳定蛋白的纯化十分有利。
缺点:
1.除特异性的吸附外,仍然会因分子的错误认别和分子间非选择性的作用力而吸附一些杂蛋白质,另洗脱过程中的配体不可避免的脱落进入分离体系。
2. 载体较昂贵,机械强度低,配基制备困难,有的配基本身要经过分离纯化,配基与载体耦联条件激烈等。
三.离子交换层析
优点:
1.领域宽:适合任何带点生物分子的分离(蛋白,多肽,核酸,多糖)
2.高分辨率:只有一个氨基酸区别的样品也可以分离。
3.经过洗脱后可以重复使用层析柱。
4.有亲水性,对大分子吸附性不强,温和条件可洗脱,蛋白质不易变性
缺点:
1.定性能力较差
四.高效液相层析
优点:
1.分辩率高于其它色谱法
2.速度快,十几分钟到几十分钟可完成;
3.重复性高
4.高效相色谱柱可反复使用
5.自动化操作,分析精确度高
缺点:
分析成本高,液相色谱仪价格及日答常维护费用贵,分析时间一般比气相长。
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