蛋白纯化系统的一般操作

蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTAEXPLORER、AKTAPILOT、AKTAPURIFIER等多种型号的设备。以下以AKTAEXPLORER为例简单介绍AKTA蛋白纯化系统的一般操作。

下面给大家讲讲蛋白纯化系统的一般操作，我们一起看看吧。

蛋白纯化系统的一般操作，如下：

1.开机

按位于底部平台前左侧的ON/OFF按钮，打开色谱系统，然后打开电脑电源。待仪器自检完毕(CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁)。双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。UNICORN的操作界面分为四个窗口

2.准备工作溶液和样品

所有的工作溶液和样品必须经过0.45μm 的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。当缓冲液中含有有机溶剂(如乙腈、甲醇)，需在使用前用低频超声脱10min。

3.清洗及管道准备

首先将A泵的进液管道(A1) 放入缓冲液或平衡液中，将B泵的进液管道(B1)放入高盐溶液中，在system control 窗口点击工具栏内的manual,选择pump→pump wash explorer,选中A1,B1管道为ON，execute。 泵清洗将自动结束。

4.安装层析柱.

在manual 里选择pump→flow rate， 输入一-定的低流速，insert; 选择Alarm&mon- -alarm pressure,设置high alarm (输入填料或层析柱的耐受压力，以较低者为设置值，具体可在填料说明书或层析柱说明书中查到)，insert， execute 待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。

5.开始纯化:

1)在柱子平衡好之后(电导，pH的数值和变化趋势稳定)即开始上样了。此时应.将紫外调零, 选择Alarm&mon→autozero，exectue.

2)具体上样方式: AKTA 系统的上样方式比较灵活，可以根据具体样品的条件进行上样，包括用样品环上样、用系统泵上样、用样品泵上样等，这里以用系统泵上样为例简单介绍上样过程。点击pause,将A1放入样品中，点击countine，待样品上完后，再将A1放入到平衡液中继续消洗柱子。

3)洗脱:.上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。在manual里选择pump→gradient,按照自己的工艺选择targetB ( 100%)和length (10CV)。

4)设定收集:选择Frac→fractionation 900,输入每管收集体积，exectue。 结束固定体积收集选择Frac→fractionation _stop_ _900， exectue。

5)清洗泵及卸下层析柱:

将A1和B1入口放入纯水中，启动pump wash purifier 功能冲洗A泵和B泵及整个管路。然后再将A1和B1入口放入20%乙醇中，同样操作将乙醇冲满整个管路保存。再给柱子-一个慢流速，设置系统保护压力，然后先拆柱子的下端，正在滴水的时候将堵头拧上，再拆柱子的上端，最 后拧上上端的堵头。整个过程中应防止气泡进入。

6)关闭电源:

从软件控制系统的第 一个窗口unicorn manager点击退出，其他窗口不能单独关闭。然后关闭AKTA主机电源，关闭电脑电源。